麻痹病_麻痹病简介

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所属分类:养殖技术

由病毒引起成年蜜蜂神经系统麻痹的传染病。别名瘫痪病。主要病毒有慢性麻痹病病毒、急性麻痹病病毒、慢性麻痹病伴随病毒和缓慢性麻痹病病毒。其中慢性麻痹病病毒对蜜蜂危害最大,分布最广。美国、加拿大、墨西哥、英国、法国、德.国、瑞士、奥地利、意大利、保加利亚、马尔他、澳大利亚、新西兰、前苏联境内和中国发生尤为普遍。

病原 麻痹病病毒属微核糖核酸病毒科,肠道病毒属。慢性麻痹病病毒(Chronic paralysis virus,简称CPV)为不等轴病毒粒子,长椭圆形,长30、40、55和65纳米,宽22纳米(图1)。英国L.贝利分离出的病毒粒子沉降系数分别为82 S、97~106 S、110~124S与125~136S。不同地区的慢性麻痹病病毒的沉降系数可能不同,例如美国分离出的慢性麻痹病病毒沉降系数仅为86 S、96 S和109S,其中长形粒子也较英国分离的病毒制剂中少得多。然而,大小不同的病毒粒子在氯化铯中的浮密度均为1.33克/毫升,血清学相同,主要蛋白质分子量为2.35×104,RNA分子量为0.35×106、0.90×106和1.35×106。病毒主要集中在病蜂的头部、蜜囊、舌腺、胸部和腹部神经节内。经纯化的病毒粒子具有很强的感染力,受感染的蜜蜂在35℃恒温下饲养五六天出现颤抖症状,失去飞翔能力,一天后死亡。

在感染慢性麻痹病的蜂群中常出现一种慢性麻痹病伴随病毒(Chronic paralysis virus associate,简称CPVA)。病毒为球型,直径为17纳米(图2),沉降系数为41S。在氯化铯中的浮密度为1.38克/毫升,蛋白质分子量为1.5×104,RNA分子量为0.35×106,与慢性麻痹病病毒无血清学关系,该病毒只有在慢性麻痹病毒存在的情况下才能复制,在蜜蜂体内有干扰慢性麻痹病毒增殖的作用。

急性麻痹病病毒(Acute paralysis virus,简称APV)为等轴球型二十面体,直径28~30纳米(图3),沉降系数为160S,在氯化铯中的浮密度为1.37克/毫升,主要蛋白质分子量为2.3×104和3.1×104。这种病毒的许多性状与囊状幼虫病病毒相似,但两者在血清学上无关,所不同之处是急性麻痹病病毒在pH低于4时是稳定的,它的浮密度随pH值增加而增加。病毒主要积累在蜜蜂头部,特别是舌腺及脂肪体细胞的细胞质内。瓦螨与这种病毒的关系密切,它可以刺破成年蜂的体壁,将病毒刺入血淋巴,在体内复制,导致蜜蜂死亡。在夏季,蜂团温度在35℃下,积累的病毒量比在30℃下多3倍以上,而慢性麻痹病毒在30℃下增殖却比在35℃下快。

缓慢性麻痹病病毒(Slow paralysis virus,简称SPV)为等轴二十面体球型病毒,直径为30纳米(图4),沉降系数为176S,在氯化铯中的浮密度为1. 37克/毫升,蛋白质分子量为2.7×104、2.9×104和4.6×103,与上述3种麻痹病毒无血清学关系,病毒注射成年蜜蜂体后12天左右死亡,死亡前一两天,前两对足出现典型麻痹症状。

诊断方法 主要诊断方法有:

症状诊断 患慢性麻痹病的蜜蜂通常有两种症状,即腹部膨大型和黑蜂型。春季出现的多为腹部膨大型,行动迟缓,身体颤抖,失去飞翔能力;秋季出现的多为黑蜂型,头尾发黑,身体瘦小,颤抖。由于受健康蜂的驱逐和拖咬,病蜂多集中在巢脾框梁上、蜂箱底部和巢脾的边缘处。患急性麻痹病的蜜蜂无明显症状表现,但死亡异常迅速。

电子显微镜诊断 取一定数量的病蜂,按每只蜂体加1毫升0. 01M、pH6. 7的磷酸缓冲液研磨、捣碎,再加1/10体积的乙醚和四氯化碳继续乳化,经差速离心或密度梯度离心, 然后将纯化的病毒液用2%的磷钨酸或醋酸双氧铀负染,置电镜下观察,若发现大量长短不一的椭圆形病毒粒子,则为慢性麻痹病病毒。若发现大量均一的球型病毒粒子,则为急性麻痹病病毒。

血清学诊断 常用的有琼脂免疫双扩散法、对流免疫电泳法、酶联免疫吸附法和双抗体夹心诊断法。在采用这些方法前,首先应制备样品和抗体。取病蜂10只置研钵内研磨,加7毫升0.01M、pH6.7的磷酸缓冲液和1.5毫升的DIECA及1.5毫升乙醚,制备悬浮液,以4000转/分的转速离心5分钟,上清液作检验用。抗体的制备是将纯化的病毒液免疫家兔,制备免疫抗体血清,可用于一般血清学诊断,如作酶联免疫吸附诊断则需进一步纯化抗体血清,获得免疫球蛋白IgG,并用酶标记后应用。三种血清学诊断法的具体操作程序分别为:①琼脂免疫双扩散诊断法。抗原和抗体在同一凝胶内彼此扩散,两者相遇后形成特异的沉淀线。将精制的琼脂粉用0. 05M、pH8. 6的巴比妥缓冲液配制成1.5%浓度,也可用蒸馏水或生理盐水配制。凝胶打孔为梅花型,孔径为4毫米,孔距5毫米,中间孔加麻痹病病毒抗血清,周围孔加待检测的样品,置37℃并保持一定湿度,自然扩散24小时,如出现明显的沉淀线即为阳性,无沉淀线出现为阴性。②对流免疫电泳诊断法。抗原在碱性缓冲液中带负电,在电场中向正极移动,而抗体则向负极移动,在短时间内,抗原和抗体会聚,形成沉淀线。制备琼脂板所用的缓冲液为0.025 M, pH 8. 6的巴比妥液,电泳槽中所用的缓冲液为0.05M pH8.6的巴比妥液,琼脂板按双排或3排打孔。孔径5毫米,孔距6毫米,琼脂板两端用纱布搭桥与电泳槽中的缓冲液相连,抗体端接正极,抗原端接负极,电压5~10伏/厘米,电流强度为1~4毫安/厘米,电泳时间为30~60分钟,如出现沉淀线,可关闭电源;若不清晰,可置室温下数小时,使其继续扩散。出现沉淀线者为阳性,无沉淀线出现即为阴性。③酶联免疫吸附双抗体夹心诊断法。利用酶与抗体结合后,即不改变其免疫学反应特异性,也不影响酶本身的活性,在酶底物作用下,产生一种光学显微镜和电子显微镜下可见的不溶性反应物,揭示病毒的存在。纯化IgG抗体,抗血清经35%饱和硫酸铵沉淀,提取的丙体球蛋白用0.85% 生理盐水透析至无铵离子,再经DEAE-纤维素离子交换柱层析提取IgG球蛋白,供标记用。IgG球蛋白标记采用过碘酸钠氧化法。制备辣根过氧化物酶反应溶液,4℃下对碳酸缓冲液透析,加纯化的IgG抗体,在硼氢化钠作用下与酶液反应并对磷酸盐缓冲液(PBS)透析,经饱和硫酸铵溶液沉淀3次,测定酶标记IgG抗体酶量及克分子比值。双抗体夹心诊断程序是,包被IgG抗体于聚苯乙烯塑料管或塑料板内,37℃温浴3小时,4℃冰箱内过夜,次日用吐温磷酸缓冲液洗涤3次,每次间隔3~5分钟。倾倒洗液,加待检样品液,37℃温浴3小时,用上述方法洗3次,倾倒洗液后加酶标记IgG抗体,37℃温浴3小时,在4℃下过夜,次日按上述方法洗3次,弃洗液,再加1%联大茴香胺底物溶液,37℃温浴30分钟,出现棕色者为阳性,即患病,无色者为阴性,即无病。这种方法可用于蜂场麻痹病的早期诊断。(彩图51)

防治措施 麻痹病主要通过病蜂传染,一只病蜂蜜囊内含有多达1011个病毒粒子,当蜜蜂相互接触传递食物时,健康蜂便受到感染。其次,病蜂在将采集的花粉加工成蜂粮时,病毒粒子亦随唾液腺混入其中,使其他取食蜂粮的蜜蜂受到感染。雅氏瓦螨是传播病毒的媒介。在英国,麻痹病占成年蜂病的比例较大,有的年份,成年蜂传染病的70%属于麻痹病。麻痹病也是中国分布较广危害养蜂生产的一种成年蜂主要传染病,春季和秋季发生较普遍。应用核糖核酸酶防治麻痹病,具有阻抗病毒核酸合成和增殖作用。使用方法是15毫升水加50毫克核糖核酸酶,喷洒在脾和蜜蜂身上,但药物价格昂贵,不易在蜂场推广使用。通常是在健康蜂群里培育优质蜂王用以更换病群中的蜂王,增强繁殖力,壮大蜂群群势;饲喂蜂群时加入奶粉、豆粉、花粉及维生素等以补充营养,增强蜜蜂对疾病的抵抗力;杀灭和淘汰病蜂,减少传染源;将升华硫磺撒在蜂路上,可以驱杀病蜂,控制麻痹病,抑制亮热厉螨。每群每次用药5~10克,每隔7天用药1次,3次为一个防治疗程。中国农业科学院蜜蜂研究所等单位联合研制的“抗蜂病毒1号”,其主要成分为酞丁胺,对麻痹病具有显著的治疗效果和预防作用,使用浓度为100微克/毫升,每框蜂用药量为10~20毫升,隔日喷喂1次,连续防治5次为一个疗程,防治效果可达90%以上。

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